大鼠卵磷脂膽固醇?；D(zhuǎn)移酶（LCAT）酶聯(lián)免疫分析（ELISA）

試劑盒使用說明書

本試劑盒僅供研究使用。

藥品名稱：

通用名：大鼠卵磷脂膽固醇?；D(zhuǎn)移酶（LCAT）酶聯(lián)免疫分析試劑盒

使用目的：

本試劑盒用于測定大鼠血清，血漿及相關(guān)液體樣本中卵磷脂膽固醇?；D(zhuǎn)移酶（LCAT）

含量。

實驗原理

本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標本中大鼠卵磷脂膽固醇?；D(zhuǎn)移酶（LCAT）水平。用

純化的大鼠卵磷脂膽固醇?；D(zhuǎn)移酶（LCAT）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗

的微孔中依次加入卵磷脂膽固醇酰基轉(zhuǎn)移酶（LCAT），再與HRP 標記的卵磷脂膽固醇酰基轉(zhuǎn)

移酶（LCAT）抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標抗體復(fù)合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB 顯

色。TMB 在HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。顏色的深淺

和樣品中的卵磷脂膽固醇酰基轉(zhuǎn)移酶（LCAT）呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm 波長下測定吸

光度（OD 值），通過標準曲線計算樣品中大鼠卵磷脂膽固醇?；D(zhuǎn)移酶（LCAT）濃度。

試劑盒組成

1 20 倍濃縮洗滌液30ml×1 瓶7 終止液6ml×1 瓶

2 酶標試劑6ml×1 瓶8 標準品（360U/L） 0.5ml×1 瓶

3 酶標包被板12 孔×8 條9 標準品稀釋液1.5ml×1 瓶

4 樣品稀釋液6ml×1 瓶10 說明書1 份

5 顯色劑A 液6ml×1 瓶11 封板膜2 張

6 顯色劑B 液6ml×1/瓶12 密封袋1 個

標本要求

1．標本采集后盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻進行，提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能

馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融

2．不能檢測含NaN3 的樣品，因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

操作步驟

1. 標準品的稀釋與加樣：在酶標包被板上設(shè)標準品孔10 孔，在*、第二孔中分別加標

準品100μl，然后在*、第二孔中加標準品稀釋液50μl，混勻；然后從*孔、第二

孔中各取100μl 分別加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl，

混勻；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl 棄掉，再各取50μl 分別加到第五、第六孔

中，再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul，混勻；混勻后從第五、第六孔中各

取50μl 分別加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl，混

勻后從第七、第八孔中分別取50μl 加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分別加標準

品稀釋液50μl，混勻后從第九第十孔中各取50μl 棄掉。（稀釋后各孔加樣量都為50μl，

濃度分別為240 U/L，160 U/L ，80 U/L，40 U/L， 20U/L）。

2. 加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、待測樣

品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣

2

品終稀釋度為5 倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混

勻。

3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘。

4. 配液：將20 倍濃縮洗滌液用蒸餾水20 倍稀釋后備用

5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30 秒后棄去，如此

重復(fù)5 次，拍干。

6. 加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。

7. 溫育：操作同3。

8. 洗滌：操作同5。

9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色

15 分鐘.

10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。

11. 測定：以空白空調(diào)零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）。測定應(yīng)在加終止

液后15 分鐘以內(nèi)進行。

計算

以標準物的濃度為橫坐標，OD 值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線，根據(jù)樣品的

OD 值由標準曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標準物的濃度與OD 值計算出標

準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD 值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，

即為樣品的實際濃度。

注意事項

1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30 分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未

用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。

2．濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果。

3．各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間好

控制在5 分鐘內(nèi)，如標本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。

4． 請每次測定的同時做標準曲線，好做復(fù)孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高（樣本OD 值

大于標準品孔*孔的OD 值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n 倍）后再測定，計

算時請后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。

5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6．底物請避光保存。

7．嚴格按照說明書的操作進行，試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.

8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。

9．本試劑不同批號組分不得混用。

10. 如與英文說明書有異，以英文說明書為準。

檢測范圍：

10U/L -300 U/L

規(guī)格：

96 人份/盒

保存條件及有效期

1．試劑盒保存：；2-8℃。

2．有效期：6 個月